制備型液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小，可以分為：低壓液相色譜、中壓液相色譜和高壓液相色譜。

低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊，沒有統(tǒng)一、明確的標準。下面我們來簡單介紹。

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1. 低壓色譜（LPLC）

? ? ?柱壓一般低于5bar（或者75psi）。

???? 低壓色譜一般是由蠕動泵、進樣閥和檢測器組成，可以連續(xù)化，實現(xiàn)自行的梯度淋洗和餾分收集等操作。色譜柱管一般是玻璃的，長度一般為240

，內(nèi)徑為10

。填料一般使用軟質的葡聚糖、瓊脂糖、纖維素、聚合物等，粒徑一般為40-130μm。

2. 中壓液相色譜（MPLC）

? ??柱壓在5-20bar（或75-300psi）之間，廣泛用于實驗室和工業(yè)規(guī)模的生物制品（如動物臟器提取液、濃縮液、體液、植物提取液、生物技術發(fā)酵液等—往往需要經(jīng)過濾膜作初級凈化）的處理，以提取或純化所需的產(chǎn)品。

中壓液相色譜的主要部件為輸液泵、進樣閥、檢測器、餾分收集器等。慧德易公司自主研發(fā)的QuikSep AutoBio全自動層析系統(tǒng)是為實驗室級別生物制品純化工藝開發(fā)及制備專門設計而成。采用堆疊式管路設計，實現(xiàn)最小的管路死體積，所有閥門、柱塞泵、檢測器均采用模塊化方式，可進行密集的程序化方法探索，實現(xiàn)儀器最大智能化。

對于一般中壓制備色譜，當色譜柱直徑較大時，柱頭往往設計成錐形或有類似于傘狀的液流導向結構，使得當大量樣品進入到柱頭上時，能迅速地分散到整個柱橫截面上，及時被流動相沖走，避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠（如Sepharose CL，Superose等），聚合物微球，復合材料介質或硬質SiO₂基體的化學鍵合相等，粒徑一般在20-60μm（最常用的填料尺寸是15-25μm，25-40μm或40-60μm），可采用濕法或者干法裝柱。

3. 高壓液相色譜（HPLC）

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是指柱壓一般大于20bar（或300psi）的“高壓（高效）液相色譜”，通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000，一般是在2000-20000的范圍之間。

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當需要從大量的物質中分離純化不足1%的所需成分時，分離工作將會十分困難，往往在純化的最后階段需要使用10μm或更小顆粒的高效填料。為獲得所需微量組分，可采用如下分離手段：制備型分離-半制備型分離-分析型分離-產(chǎn)物。為提高每次分離獲得純品的數(shù)量，制備型高效液相色譜分離通常在超載情況下運行。

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??? 高壓液相色譜，即目前常用的高效液相色譜。色譜柱內(nèi)裝填的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相（5-30μm），為使流動相流出，需采用較高的壓力，同時系統(tǒng)的復雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高。而裝填較大顆粒的固定相時，如中壓液相色譜系統(tǒng)，裝柱較容易，色譜柱的通透性較高（只需較低的泵壓力），可采用更大的色譜柱和更經(jīng)濟的儀器，由此分辨率也較低。

4. 用分析型高壓液相色譜進行制備型分離

? ??當所需純化合物的量很少時（微克級至幾微克），可用分析型色譜柱進行多次分離。效果和利用大直徑色譜柱進行一次性分離相同。采用小直徑色譜柱時，可利用已有的分析型儀器，而無需在色譜柱、填料及附件方面投入更大資金；另外，還可在很大程度上避免由于放大所產(chǎn)生的問題，使分離速度加快。

??? 小直徑色譜柱的尺寸一般為4.6×250mm，通常裝有反相填料，每次可進樣5-100μg，通常多次進樣分離，可獲得足夠的純品。

通常需用分析型色譜柱進行分離的一個領域是對多肽類化合物的純化。生物活性肽的含量通常很低，用分析型高效液相色譜作為最后的純化手段時，不會使色譜柱超載。為了提高分離效率，可將分析型高效液相色譜柱串聯(lián)起來使用。此時可采用顆粒度在20-30μm的填料，以保持適當?shù)耐ㄍ感裕绕涫钱斒褂煤軇r。當使用正己烷等有機溶劑時，由于流動相的粘度較低，可使用顆粒度為10μm的填料。然而由于分析型色譜系統(tǒng)無法提供大規(guī)模制備型分離所需的流速，其應用受到一定限制。

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??? 北京慧德易科技有限責任公司致力于為天然產(chǎn)物、化學合成藥物以及生物制藥等相關企業(yè)及科研院校提供專業(yè)和高品質的分離樹脂、純化介質、高效液相色譜柱，以及全套的分析液相、中高壓制備液相、DAC、工業(yè)層析操作系統(tǒng)和層析柱，為客戶提供從小試、中試及生產(chǎn)全套設備及工藝開發(fā)和整體解決方案。

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